分析粗多糖含量測(cè)定中選擇葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品的原因
多糖是存在于自然界的醛糖和(或)酮糖通過(guò)糖苷鍵連接在一起的聚合物(一般10個(gè)以上)。多糖是一切有生命的有機(jī)體*的成分，它與維持生命的種種生理機(jī)能有著密切的。用于粗多糖含量測(cè)定的方法有很多，一類(lèi)是利用了多糖的還原性，測(cè)定還原性多糖的方法有3, 5-二硝基水楊酸鹽(DNS)比色法和Somogyi-Nelson法。另一類(lèi)測(cè)定方法，也是現(xiàn)在普遍使用的方法，是利用多糖在強(qiáng)酸性條件下脫水生成糠醛或其衍生物，然后再與酚類(lèi)或胺類(lèi)化合物縮合，生成有特殊顏色的物質(zhì)的這一性質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，這類(lèi)方法有地衣酚-硫酸法、苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法。
苯酚-硫酸法是用得較多的方法，苯酚-硫酸試劑可與游離的寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸起顯色反應(yīng)，己糖在490 nm處有zui大吸收值，吸收值與糖含量呈線性關(guān)系。此法是先用標(biāo)準(zhǔn)糖制作標(biāo)準(zhǔn)曲線后，再通過(guò)多糖的顯色反應(yīng)測(cè)定吸光度，然后根據(jù)其在曲線上的位置推算出多糖的濃度從而推算其含量。此法操作簡(jiǎn)單、快速、靈敏、重復(fù)性好，對(duì)每種糖僅需制作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。蒽酮-硫酸法是另一種常用的方法，其原理是利用糖類(lèi)遇濃硫酸脫水后生成糖醛或其衍生物，可與蒽酮試劑縮合，反應(yīng)后溶液呈藍(lán)綠色，于620 nm處有zui大吸收，顯色深度與多糖的含量呈線性關(guān)系。
目前，在制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)品的選用上普遍存在爭(zhēng)議。葡萄糖因?yàn)槠涞土膬r(jià)格和方便的來(lái)源，一直是研究人員的。但當(dāng)我們深究比色法的原理，發(fā)現(xiàn)其本身不能區(qū)分單糖和寡糖，所以它的測(cè)定結(jié)果很大程度上依賴(lài)于標(biāo)準(zhǔn)品的選擇。此外，比色法通常用濃硫酸短時(shí)間水解粗多糖，對(duì)于分子量較小的粗多糖，高濃度的硫酸可以在較短時(shí)間內(nèi)將其水解成寡糖和單糖，但當(dāng)粗多糖的分子量較大時(shí)，水解是很難控制的。比如對(duì)香菇粗多糖（分子量500,000——1,000,000）的*水解就需要4M HCl或2M H2SO4于100℃作用3-6小時(shí)。因此如果用葡萄糖做標(biāo)準(zhǔn)曲線，勢(shì)必對(duì)粗多糖樣品中大分子部分的測(cè)量帶來(lái)很大的誤差。對(duì)于比色法測(cè)定當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品與被測(cè)樣品的結(jié)構(gòu)類(lèi)似時(shí)，得到的結(jié)果要準(zhǔn)確得多，用葡萄糖做標(biāo)準(zhǔn)品和用葡聚糖做標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)粗多糖含量時(shí)，前者測(cè)的結(jié)果不同程度的偏高。這樣看來(lái)，用葡萄糖作為測(cè)定多糖含量的標(biāo)準(zhǔn)品是不合適的。
認(rèn)識(shí)到這一事實(shí)，人們開(kāi)始逐漸改用葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品作為測(cè)定粗多糖含量的標(biāo)準(zhǔn)品，使用的是分子量為500,000的葡聚糖。
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